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分子提取方法

点击次数：  更新时间：2018/6/2 14:19:57  

DNA提取

（二）从各种组织中提取DNA

1.从实体组织中提取DNA（新鲜组织或冰冻组织）

（1）无菌条件下，组织切片适当小块，液氮中冷冻保存。

（2）取出组织，置乳钵中迅速磨成粉末，加入含10倍体积的裂解液和蛋白酶K，融化组织。

（3）移入50ml离心管，37℃，孵育1h。

*若组织块不易裂解时可适当延长作用时间。

（4）以下步骤同培养细胞DNA提取法。

2.从血液中提取DNA（可以用新鲜血、贮藏血、运送血、也用于羊水中提取DNA）

（1）无菌采血8-20ml，加入到含有柠檬酸试管中，也可用于2%EDTA抗凝。

（2）室温，1300g，15min，弃上层血浆。

（3）小心吸取淡黄色的一层细胞，移入一新的试管中。

（4）再次离心，分离淡黄色细胞层。

（5）加15ml裂解液，37℃孵育1h。

（6）加入适量蛋白酶K液，至终浓度为100ug/ml。

（7）用玻璃棒搅匀，使酶均匀分布。以下步骤同培养细胞DNA提取法。