3.DNA定量
(1)超微量核酸定量仪直接测定核酸浓度:同RNA定量。
(2)紫外分光光度计间接测定核酸浓度:同RNA定量。
(3)嗅化乙锭(EB)荧光测定法:有时样品中含核酸量不足(低于250ng/ml),难于用分光光度计测定,或含有其他吸收紫外光妨碍DNA时,可利用嵌入DNA中的EB分子受紫外光激发发射的荧光来进行测定。此时,总荧光强度与DNA总量成正比,通过比较待测样品和标准品的荧光强度,可测定样品DNA的含量。此法可测出1-5ng/ml DNA。要注意的是EB是一种有毒的致癌剂,使用时应戴手套,移液器也最好专用。
4.DNA保存
(最好溶于TE缓冲液(PH 8.0),4℃保存数日,-20℃保存数月至数年,-70℃保存5年以上。EDTA螯合二价离子,抑制DNA酶活性,减少DNA的脱氨反应。)
(1)配置TE缓冲液:100ml配方
组成:10mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)/1mmol/L EDTA(pH 8.0)
1mol/L Tris-HCl(pH 8.0) 1ml
0.5mol/L EDTA(pH 8.0) 2ml
DDW定容至 100ml
高压灭菌,室温,保存。
(2)配置1mol/L Tris-HCl(pH 8.0):1L配方
Tris(MW 372.24) 186.12g
DDW 800ml
溶解。NaOH调PH至8.0.
DDW定容至1L
高压灭菌,室温,保存。