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DNA的定量和保存

点击次数:  更新时间:2018/6/13 14:50:39  

3.DNA定量

(1)超微量核酸定量仪直接测定核酸浓度:同RNA定量。

(2)紫外分光光度计间接测定核酸浓度:同RNA定量。

(3)嗅化乙锭(EB)荧光测定法:有时样品中含核酸量不足(低于250ng/ml),难于用分光光度计测定,或含有其他吸收紫外光妨碍DNA时,可利用嵌入DNA中的EB分子受紫外光激发发射的荧光来进行测定。此时,总荧光强度与DNA总量成正比,通过比较待测样品和标准品的荧光强度,可测定样品DNA的含量。此法可测出1-5ng/ml DNA。要注意的是EB是一种有毒的致癌剂,使用时应戴手套,移液器也最好专用。

4.DNA保存

(最好溶于TE缓冲液(PH 8.0),4℃保存数日,-20℃保存数月至数年,-70℃保存5年以上。EDTA螯合二价离子,抑制DNA酶活性,减少DNA的脱氨反应。)

(1)配置TE缓冲液:100ml配方

组成:10mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)/1mmol/L EDTA(pH 8.0)

1mol/L Tris-HClpH 8.0)  1ml

0.5mol/L EDTApH 8.0)  2ml

DDW定容至        100ml

高压灭菌,室温,保存。

(2)配置1mol/L  Tris-HCl(pH 8.0):1L配方

Tris(MW 372.24) 186.12g

DDW           800ml

溶解。NaOHPH8.0.

DDW定容至1L

高压灭菌,室温,保存。