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蛋白印迹法(三）

点击次数：  更新时间：2018/5/15 16:18:03  

蛋白印迹法(三）

三 电泳

电泳条件：电压200V，电流8mA，染料进入分离胶时电流增加到16mA，时间一般2-3小时。

*溴酚蓝刚跑出胶即可终止电泳进行转膜，也可以根据时间经验停止电泳。

*电泳后检测蛋白是否迁移正确与平均，可采用铜染色或考马斯亮蓝染色检测，如凝胶中的蛋白需要进行转膜则需要可逆的铜染法，否则采用不可逆考马斯亮蓝法。

*铜染色法：

1. 电泳胶用蒸馏水洗数秒钟    

2. 加入0.3mol/LCuCl2染色5-10min    

3. 去离子水洗一次    

4. 暗室观察蓝色背景下出现的蛋白透明条带   

5. 胶置于0.1-0.25mol/L Tris/0.25mol/L EDTA(PH 8.0)缓冲液中漂洗脱色两次    

6. 电转缓冲液中转膜。