蛋白质表达分析 您的位置：首页 > 实验方法 蛋白质表达分析

蛋白印迹法(二)

点击次数：  更新时间：2018/4/25 15:21:34  

蛋白印迹法

1. 三 电泳

2. 电泳条件：电压200V，电流8mA，染料进入分离胶时电流增加到16mA，时间一般2-3小时。

3. *溴酚蓝刚跑出胶即可终止电泳进行转膜，也可以根据时间经验停止电泳。

4. *电泳后检测蛋白是否迁移正确与平均，可采用铜染色或考马斯亮蓝染色检测，如凝胶中的蛋白需要进行转膜则需要可逆的铜染法，否则采用不可逆考马斯亮蓝法。

5. *铜染色法：

6. 1．电泳胶用蒸馏水洗数秒钟

7. 2．加入0.3mol/LCuCl2染色5-10min    

8. 3．去离子水洗一次     

9. 4．暗室观察蓝色背景下出现的蛋白透明条带    

10. 5．胶置于0.1-0.25mol/L Tris/0.25mol/L EDTA(PH 8.0)缓冲液中漂洗脱色两次

11. 6 . 电转缓冲液中转膜。