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蛋白印迹法（一）

点击次数：  更新时间：2018/4/14 13:42:11  

蛋白印迹法（一）

蛋白印迹（Western blot, WB）是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种试验方法，是将蛋白质通过SDS-PAGE电泳后，再转移到杂交膜上，然后通过抗原抗体复合物对特定蛋白质进行特异性检测的方法。

1 检测原理

待测蛋白根据其性质（分子量、分子大小、电荷以及其等电点）采用电泳方法进行分离，通过电流将凝胶中的蛋白质转移到聚偏二氟乙烯膜（PVDF）上，利用一抗与抗原特异性结合的原理，以抗体作为探针钓取目的蛋白。

二 样品处理及上样

1、取15-20ug蛋白，加2倍SDS上样缓冲液7ul，DDW定容至总体积14ul。

* 上样总体积一般少于15ul，加样孔的最大限度可加20ul样品。

2、95℃孵育5min，使蛋白变性。

3、电泳槽内加入足够的电泳液。

4、上样，分子Marker也要一起上样，用微量进样器贴壁吸取样品，加样器枪头插到加样孔中缓慢加入样品。

*样品吸出时不要吸进气泡。加样太快可使样品冲出加样孔，若有气泡也可能使样品溢出，加下一个样品时，进样器枪头需在外槽电泳缓冲液中洗涤3次，一面交叉污染，有条件最好加样时一个样品换一个枪头。