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DNA定量测定-Feulgen反应

点击次数：  更新时间：2017/8/12 18:22:04  

实验背景与原理：

　　

DNA是主要的遗传物质，集中于染色体上。在真核细胞中DNA主要存在于细胞核中，在线粒体和叶绿体中也有少量分布。DNA的基本组成单位是脱氧核糖核酸，它由脱氧核糖、碱基和磷酸组成，通过与一些化学物质相互作用可产生有色反应，最终显示DNA在细胞中的存在部位及分布情况。

　　

Feulgen染色是经典的显示脱氧核糖核酸的的方法。其基本反应原理是标本经稀盐酸水解后，DNA分子中的嘌呤碱基被解离，从而在核糖的一端出现醛基。Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应，形成含醌基的化合物分子，因醌基为发色团，故可呈现出紫红色，即DNA经稀酸水解后产生的醛基，具有还原作用，可与无色品红结合形成紫红色化合物，从而显示出DNA的分布。

　　

DNA水解后的脱氧核糖的C-1位置释放的醛基可与席夫试剂反应显紫红色。细胞中只有DNA才具有这种专一的Feulgen反应，因此利用此反应可以鉴定DNA的存在。另外由于此反应对含有DNA的核结构显示细致、清晰、染色稳定，因此被广泛用于核及染色体的研究中

　　

实验步骤

　　

1.切片经脱蜡入水。

　　

2.用1mol/L HCl 浸洗。

　　

3.切片放入60℃预热的1mol/L HCl 内8min。

　　

4.室温下1mol/L HCl 浸洗。

　　

5.蒸馏水浸洗2次，每次5min.

　　

6.加入席夫液，于室温反应30-60min。

　　

7.亚硫酸钠水溶液中漂洗3次，每次2min。

　　

8.蒸馏水浸洗两次，每次5min。

　　

9.脱蜡，透明，封片。

　　

10.镜检

　　

注意事项

　　

1. 水解时间要适宜。一般8-15min.

　　

2. 漂洗时，所用的亚硫酸钠水溶液现配现用。

　　

3. 为减少假阳性和非特异性染色必须做对照试验。仅需地3步，即60℃ 1mol/L HCl 水解改为室温15min, 其余相同，结果DNA应为Feulgen 阴性对照。

（本文转载丁香通）