实验方法

DNA实验技术 您的位置:首页 > 实验方法 DNA实验技术

核酸及核蛋白染色体

点击次数:  更新时间:2017/8/12 19:19:10  

一、Feulgen氏染色法:  该方法是显示DNA的一种常用方法。其基本原理是在酸水解下,去DNA中的嘌呤,使脱氧核酸的醛基暴露出来,然后再与Schiff氏试剂反应,生成紫红色产物,用于显微分光光度计和流式细胞测量计对细胞进行静态DNA测量和流式细胞测量。

  

操作方式:

  

(1)切片常规脱蜡至水。

  

(2)蒸馏水洗,1NHCI水溶稍洗。

  

(3)浸入1NHCI水溶液60℃,8-10分钟。

  

(4)取出后,1NHCI水溶液稍洗,蒸馏水洗数次。

  

(5)入Schiff氏液中室温下,暗环境30-90分钟。

  

(6)流水冲洗数分钟。

  

(7)常规脱水、封片。  结果:DNA呈紫红色。

  

注意事项: 1、1NHCL、Schiff液的配制方法见前。

  

2、该染色的优劣很关键。在于组织的固定。用甲醇85ml,福尔马林10ml,冰醋酸5ml配制的固定液效果很好。此外1NHCL液中酸化时间需严格控制。

  

3、5%亮绿淡复染,使胞浆及其它组织呈绿色。

  

二、核仁组成区蛋白显示法(PLOTON改良法)  核仁组成区(Nucleolar Organier regions,NORS)是转录核糖体RNA(rRNA)的染色体片断并与嗜银酸性非组蛋白有关。核糖体RNA基因直接控制着核糖体和蛋白质的合成,因此,计数细胞内的AgNORS的数量可反映细胞增殖的情况。经典的方法是经Plotor改进的银染法。  操作方法:

  

(1)切片脱蜡入水。

  

(2)蒸馏水洗。

  

(3)去离子水洗。

  

(4)切片至ploton氏银液中室温下,暗环境60-90分钟。

  

(5)去离子水洗。

  

(6)蒸馏水洗。

  

(7)常规脱水封片。

  

结果:AgNORS位于细胞核内呈黑色的颗粒状。

  

试剂的配制:

  

1、1%甲酸、2%明胶溶液(甲液) 甲酸 1ml 明胶 2g 去离子水 100ml

  

2、50%硝酸银(乙液) 硝酸银 50g 去离子水 100ml 3、ploton氏银溶液 将甲液与乙液按1:2的比例于临用前混为ploton氏银溶液。

 

注意事项:

  

1、所用器皿需经酸缸清洗。

  

2、甲液配制时,应先按1%的浓度配制好甲酸液,再以此作为溶液溶解明胶。

  

3、有人用双蒸水替代去离子水也可达到上述效果。

  

4、银染后,用0.1%氯化金调色1-3秒,可使背景变清,效果更佳。