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病毒培养实验——传代细胞培养法

点击次数:  更新时间:2017/5/2 16:16:52  

关于病毒培养实验,由于病毒必须在易感的活细胞内才能增殖,因此,根据不同病毒选择敏感动物,离体组织细胞和鸡胚进行分离培养。


实验方法原理:


从人及动物某些组织,特别是肿瘤组织,经多次传代可建立传代细胞系,这种细胞能无限地传代,某些传代细胞对病毒敏感范围较广,可用作病毒的分离鉴定,如HeLa 细胞,Hep-2 细胞及KB 细胞。


三种细胞均来自人肿瘤组织细胞,HeLa 细胞来自子宫颈癌,Hep-2 细胞来自喉癌而KB 细胞来自上颚癌。由于这几种传代细胞有致肿瘤作用,目前仅用做病毒的分离鉴定及一些病毒学研究,不能用于疫苗的生产。


实验步骤:


将成片细胞的生长液倒掉,用Hank's 液洗一次。


加入适量的0.1~0.25% 胰蛋白酶,37 ℃孵育1 分钟。


将细胞倒放,细胞在上,胰酶在下,继续孵育37 ℃5~10 分钟。


将胰蛋白酶倒掉,再加入原量的生长液,用10 毫升吸管吹打分散细胞。


用生长液按原量3-4 倍稀释,即一瓶细胞能传3-4 瓶。


病毒接种及CPE 观察:


①取已长成单层细胞的培养瓶二只,用无菌毛细滴管吸去管中液体。



②用无菌的1 毫升吸管吸稀释的腺病毒液0.1 毫升加入一只单层细胞培养瓶中,另一只加0.1 毫升营养液不接种病毒作对照,细胞瓶平放,使其接触整个细胞层,置37 ℃使作用15~30 分钟。


③取出单层细胞瓶,每只瓶中加入营养液0.9 毫升,盖紧后置37 ℃孵箱中培养1~2 天。


④取出细胞在低倍显微镜下观察,注意有无出现CPE(细胞肿胀,变圆,集聚成葡萄串状等)。 


另外我们需要思考的是:


1.  病毒为什么必须在活细胞内才能增殖?


2.  比较动物接种与鸡胚培养的优缺点?


3.  为什么目前广泛采用组织培养法培养病毒?