猪甲状腺细胞培养
点击次数： 更新时间：2018/7/19 10:24:31
实验原理：
由于甲状腺富含纤维性组织，所以甲状腺的消化分离一般采用胶原酶与胰蛋白酶联合消化法，用单一的胰蛋白酶消化效果一般；促甲状腺激素(TSH)是培养甲状腺细胞必备的，它能够起到促进甲状腺细胞生长的作用。
实验步骤：
1. 杀猪后迅速取出甲状腺 1～2 个，置于盛有 75%酒精的烧杯中，用冰盒送至实验室(1 h 以内)。
2. 立即置于pH为7.4 的PBS缓冲液(含青链霉素)中，反复漂洗，直至漂洗液清澈透明。
3. 去除包膜及结缔组织，用眼科剪子、镊子将甲状腺组织剪成1mm3 大小的碎块。
4. 置含0.25%胰酶和300 U/ml 胶原酶的容器中，放于 37℃温箱中消化60 min，每隔15min 需摇动一次。
5. 用吸管将上清液的三分之二吸入离心管中，并加入含有胎牛血清的培养基终止消化。
6. 以1000 rpm 离心10分钟后，弃上清。
7. 将细胞沉淀用F-12 培养基制成细胞悬液，充分吹打并用不锈钢网(200目)过滤，再以1000 rpm 离心10分钟，弃上清。
8. 沉淀悬于含15% 胎牛血清和1 U/L牛 TSH的F-12 培养基中，台盼蓝染色证明活细胞数大于95%，调整细胞浓度接种于培养板中(1 ml/孔)。
9. 置于 37℃的5% CO2 孵箱中，每 2-3 天换液一次，至细胞融合成片后用于实验。
本文转载自丁香园
