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分子提取方法

点击次数：  更新时间：2018/4/2 9:51:07  

生物大分子是构成生命的基础物质，主要活性成分的分子量达到上万或更多的有机分子，包括蛋白质、核酸、碳氢化合物等。分子生物学从分子水平研究核酸和蛋白等生物大分子的结构与功能，来阐明各种生命现象。

核酸的提取和纯化是核酸处理的基本技术。

分离核酸最常用苯酚、氯仿抽提法。酚和氯仿是蛋白质变性剂，酚不能抑制核糖核酸酶（RNase）的活性，尚能溶解于10%-15%的水，损失DNA，溶解部分poly（A）核糖核酸，而氯仿有加速有机相和水相的分离、去除植物色素和蔗糖等作用，其变性作用不如酚，故一般应用酚和氯仿两者反复抽提，达到去除与核酸相混的蛋白质的目的。

抽提末再用氯仿处理，处理痕量的酚，然后用水饱和乙醚抽提一次，除去样品中痕量的酚和氯仿，最后68℃水浴孵育10min挥发乙醚，便可获得纯净的核酸。

获得核酸后，尚需要进行浓缩和纯化，核酸沉淀是浓缩核酸常用的方法。核酸是多聚阴离子的水溶性化合物，能与Na+、K+、Mg2+等阴离子形成盐类二沉淀，在许多种有机溶剂中不溶解，也不会发生变性。最常用的沉淀剂为醋酸钠、氯化钠、氯化锂、氯化钾、氯化镁等，其中Mg2+的沉淀效率最高。常用的邮寄沉淀试剂有乙醇、异丙醇、乙二醇和精胺等培养细胞或组织中提取核酸后，也可用核酸浓缩仪物理方法进行浓缩。