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S1分析酵母基因寡核苷酸探针

点击次数：  更新时间：2017/8/15 16:20:58  

一、操作步骤

1.  在0.5 mL Eppendorf管中混合以下：

10-20 ug 酵母RNA

10 ul 杂交组合

加水，使终体积25 ul

40 ul 矿物油

在100度加热反应2分钟，转移到55度过夜（12-16小时）杂交（的准确温度将取决于寡核苷酸的长度和组成）。

 

2.  培养过夜后，旋管和1.5 ml 离心管中取出水层。添加275 ul S1组合，并培育在37度10-30分钟。取决于探头。

 

3.  6 ul 终止缓冲液+ 900 ul ETOH和执行标准的沉淀。洗净用80%ETOH粒料。重悬在6 ul 甲酰胺测序凝胶上样缓冲液含有0.1%SDS。加载样品8%测序凝胶。

 

二、功能

重要的控制功能有：

1、与没有核酸激酶探针。

2、含有可变数量的总RNA的反应。信号应该是线性的，如果结果是越来越多的RNA定量。

3、没有S1的测序凝胶的质量和大小的探头没有S1的治疗观察治疗探头负载500-1000每千次展示费用。

 

杂交组合：

1X S1缓冲区：

4 uM 硫酸锌

30 mM 醋酸钠pH 4.6

250 mM 氯化钠

 

10 ml 10X S1缓冲区

0.4 ml 1 M硫酸锌

3 ml 1 M醋酸钠

6.25 ml 4 M氯化钠

0.35 mL 水

 

S1组合：

27.5 ul 10X S1缓冲区

2.7 ug 变性鲑鱼精子DNA

共85个单位S1核酸酶（GIBCO / BRL）

H2O至最终体积为275 ul/反应

 

停止液：

6 ul 0.25 M EDTA

2 ug 的tRNA（大于10 mg/ml）

（本文转载丁香园）