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细胞凋亡的检测方法！

点击次数：  更新时间：2017/11/1 10:16:00  

在实验中经常需要检测细胞的凋亡情况，下面我收集了一些常用的细胞凋亡检测方法，希望对大家有帮助！

1早期检测

1) PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测

2)细胞内氧化还原状态改变的检测

3)细胞色素C的定位检测

4) 线粒体膜电位变化的检测

2晚期检测

细胞凋亡晚期中，核酸内切酶在核小体之间剪切核DNA，产生大量长度在180-200 bp 的DNA片段。

对于晚期检测通常有以下方法：

1) TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记)；

2) LM-PCR Ladder (连接介导的PCR检测) ；

3) Telemerase Detection (端粒酶检测)。

3生化检测

1）典型的生化特征：DNA 片段化；

2）检测方法主要有：琼脂糖凝胶电泳、原位末端标记（TUNEL）等；

3）TUNEL（末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记）；

4）通过DNA末端转移酶将带标记的 dNTP （多为dUTP）间接或直接接到DNA片段的3’-OH端，再通过酶联显色或荧光检测定量分析结果。可做细胞悬液、福尔马林固定或石蜡处理的组织、细胞培养物等多种样本的检测。

4LM-PCR Ladder (连接介导的PCR检测)

当凋亡细胞比例较小以及检测样品量很少（如活体组织切片）时，直接琼脂糖电泳可能观察不到核DNA的变化。通过LM-PCR,连上特异性接头，专一性地扩增梯度片段，从而灵敏地检测凋亡时产生梯度片段。此外，LM-PCR 检测是半定量的，因此相同凋亡程度的不同样品可进行比较。如果细胞量很少，还可在分离提纯DNA后，用32P-ATP和脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）使DNA标记，然后进行电泳和放射自显影，观察凋亡细胞中DNA ladder的形成。

上述两种方法都针对细胞凋亡晚期核DNA断裂这一特征，但细胞受到其它损伤（如机械损伤，紫外线等）也会产生这一现象，因此它对细胞凋亡的检测会受到其它原因的干扰。需结合其它的方法来检测细胞凋亡。