蛋白质表达分析 您的位置：首页 > 实验方法 蛋白质表达分析

免疫组化技术——结果分析

点击次数：  更新时间：2016/12/22 13:41:01  

对照组和染色结果的评价

从以下几 个方面综合评价：

1．阳性染色特点

① Ag定位，胞浆、胞核、胞膜、间质具有结构性。（非特异性～细胞与组织无区别）

② 染色强度不同：颜色深浅不一（非特异性染色 弥散性均匀）

2．组织切片制作过程的影响

① 固定不良—非特异性染色，显示不均。

② 边缘干燥—非特异性染色（常见），加抗体时勿干片。

3．人工假象与特异性结果显示不在同一平面上。

阳性对照：

用已知抗原阳性的切片与待检标本同时进行免疫细胞化学染色。对照切片呈阳性结果，标为阳性对照。

阴性对照：

用确证不含已知抗原的标本作对照，应呈阴性结果，称阴性对照。其实这只是阴性对照中的一种，阴性对照 还应包括空白、替代、吸收和抑制实验。

▲ 染色失败的几种原因：

（1）所染的全部切片均为阴性结果，包括阳性 对照在内。全部（－）原因可能：

① 染色未完全严格按照操作步骤进行；

② 漏加一种抗体，或抗体失效；

③ 缓冲液内含叠氮化钠，抑制了酶的活性；

④ 底物中所加H2O2 量少或失效；

⑤ 复染或脱水剂使用不当

（2）所有切片均呈阳性反应，原因可能是：

① 切片在染色过程中抗体过浓，或干燥了。

② 缓冲液配置中未加氯化钠和PH值不准确，洗涤不彻底。

③ 使用已变色的呈色底物溶液，或呈色反应时间过长。

④ 抗体温育的时间过长。

⑤ H2O2 浓度过高，呈色速度过快。粘附剂太厚。

（3）所有切片背景过深，原因可能是：

① 未加酶消化处理切片。

② 切片或涂片过厚。

③ 漂洗不够。

④ 底物呈色反应过久。

⑤ 蛋白质封闭不够或所用血清溶血。

⑥ 使用全血清抗体稀释不够。

（4）阳性对照染色良好，检测的阳性标本呈阴性反应。

最常见的原因是：标本的固定和处理不当。