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B 淋巴细胞膜表面免疫球蛋白检查实验

点击次数：  更新时间：2016/11/16 14:37:25  

实验材料：ICR 小鼠

试剂、试剂盒：异硫氰酸荧光素（FITC）标记的兔抗小鼠Ig 抗体、Hank's液

仪器、耗材：台式离心机、离心管、吸管、移液管

实验步骤

1.  采用颈椎脱臼法处死小鼠，解剖取出脾脏放入盛有6 ml Hank's液的平皿中，用100 目钢网研磨，混匀。从中吸取1 ml细胞悬液放入一试管中，加满Hank's液，离心1000 rpm，10 分钟，洗涤细胞一遍。倾去上清，沉积的细胞恢复1 ml容积，即为约1×107 /ml的细胞悬液。另取一支试管，吸取1×107 /ml的细胞悬液0.4 ml加Hank's液3.6 ml，即为1×106 /ml的细胞悬液。

 

2.  取2 ml离心管两只，各加入1×106 /ml的细胞悬液1 ml，用台式离心机离心2000 rpm，3 分钟，弃去上清液。一支加入荧光素标记的兔抗鼠Ig抗体100 μl，另一支不加抗体作对照，置4 ℃冰箱30 分钟。

 

3.  取出离心管，用Hank's 液洗涤细胞两次，以去除游离的抗体，最后一次离心后弃去上清液，留少许回流液，混匀，滴片，用荧光显微镜观察。