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传代细胞培养实验

点击次数：  更新时间：2018/8/7 14:57:22  

实验原理：

当初代培养成功，细胞生长增殖形成单层细胞后，进而扩展汇合，占满一切空间，此时需要进行分离培养。这一操作称传代或再培养。如拖延传代，细胞会因增殖过度，培养基营养枯竭和代谢产物积累而发生中毒。80%汇合或刚汇合细胞是理想传代阶段。

实验步骤：

1.  吸除培养瓶内旧培养液；

注意事项：

1.  把握发了传代时机，已如前述，在80%~90%汇合阶段最好，过早传代细胞产量少，过晚细胞健康状态不佳。

2.  消化时间要适度，过短细胞不易从瓶壁脱落，过长细胞可脱落流失。

3.  消化液浓度要适宜，过浓时消化作用强烈，细胞反应快，所需消化时间短，掌握不好，细胞易流失。

4.  各种细胞对消化反应不同，有的敏感，有的迟钝，因此应根据所用细胞特点制定适宜消化措施。有的细胞附着瓶壁不牢，用吸管可从瓶壁直接吹下来，但这样容易伤害细胞，细胞大片脱落掉，不易计数，应尽可能采用消化法分散细胞为妥。

5.  消化传代良好时，细胞受损害少，细胞悬液均匀，各分装样品中数量误差小，细胞生长增殖速度一致，实验结果可靠性大。

本文转载自丁香通