大鼠肝星状细胞培养实验
点击次数： 更新时间：2018/8/6 14:25:22
实验原理：
选用Wistar大鼠经消化酶灌注肝脏后,用分离液分离HSC，通过观察其自发荧光及其显著特征性结构的脂肪染色、细胞免疫化学染色等方法鉴定。
实验步骤：
1. 大鼠腹腔麻醉后在超净台上剖腹，进行门静脉插管。
2. 以D-Hanks’液灌注，同时剪开下腔静脉，冲掉血液后，改灌以100 ml 酶消化液I(0.05% IV 型胶原酶)。
3. 待肝脏变软后，离体肝脏并剪碎，继续以酶消化液II(含20U/ml DNase I 的0.05% IV 型胶原酶)消化15 min，尼龙网过滤后以450 g 离心5 min(4℃，下同)。
4. 以HBSS 重悬沉淀至10 ml，再混以20 ml Nycodenz 液，分置于离心管中，并分别覆以2-3 ml HBSS，1450 g 离心16 min 后取界面细胞。
5. 以HBSS重悬后再次离心收集细胞，以DMEM重悬后进行细胞计数，并判断存活率和产量，最后按照常规方法接种(105 细胞/cm2 )，次日换液，以后每2-3 天换液一次。
6. 传代方法：弃去培液后以D-Hanks’液洗两次，加0.125%胰酶(原代最好加0.05% EDTA)消化，镜下观察细胞突起回缩(2-5 min左右)，以完全培液(DMEM+10% NBS)终止反应(若不用EDTA，可以不需离心)， 充分吹打后以 1:2-1:3 接种，然后继续培养(5% CO2，37℃)。
本文转载自丁香园
