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实时 PCR

点击次数：  更新时间：2018/8/17 10:14:24  

一旦 RNA 收集纯化完成，可以采用对不同的细胞质或核糖体 RNA 专一的商业化的实时 PCR 试剂盒，以组成型的 rRNA 为标准对所有资料进行标定。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

1. 缓冲液、溶液和试剂

来自方案 5 的 cDNA 样品

20X18SrRNA 引物和探针（AppliedBiosystems)

20X 目的基因的引物和探针（AppliedBiosystems)

2XTagManUniversalPCRMasterMix(4304437,AppliedBiosystems,FosterCity,CA)

DEPC 处理的超纯水 (BiotecxLaboratories)(储存于 4°C)

试剂储存于-20°C

2. 特殊货备

AppliedBiosystems7700 序列监测仪（PEAppliedBiosystems，FosterCity，CA)

二、方法

1. 稀释来自方案 5 的 cDNA，1:100

2. 用 1ul 稀释溶液做对照反应，10ul 做目的反应



3.PCR 循环条件

(1)50°C，2 min。

(2)95°C，10 min。

(3)PCR 循环--n 个循环。

a.95°C,15s。

b.60°C,1min。

本文转载自丁香通