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定性鉴定之氨基转移反应

点击次数：  更新时间：2017/8/14 10:02:54  

1、要用到的试剂与器材

解剖器具、离心机、恒温水浴、干燥箱、台秤、层析系统等。

1/15mol/L磷酸缓冲液（pH=7.4）、1%谷氨酸溶液（用KOH中和至中性）、1%丙酮酸溶液（用KOH中和至中性）、0.1%碳酸氢钾溶液、0.05%碘乙酸溶液、15%三氯醋酸溶液、标准丙氨酸溶液（0.1%）、标准谷氨酸溶液（0.1%）、0.1%水合茚三酮乙醇溶液、酚溶剂。

 

2、操作方法

将兔击晕，迅速解剖，取出肝脏，在低温条件下剪碎。称取匀浆后，离心取上清液，即为制备的酶液。体外氨基移换反应。纸上层析法检查每人4个点（标准丙氨酸溶液、标准谷氨酸溶液、对照上清液、样品上清液）。点样放入层析罩内。用被酚所饱和的水溶液，平衡后，用带小漏斗的玻璃管从层析罩上加饱合酚试剂25ml于层析缸内。然后，立即盖紧塞子，当溶剂前沿达到距滤纸上端约2.5cm处，取出滤纸，晾干或吹干，以除去酚溶剂，喷洒0.1%茚三酮乙醇溶液，放入烘箱中显色氨基酸与茚三酮反应，在滤纸上呈现紫红色斑点。

 

3、关键步骤与注意事项

①取动物新鲜组织制备酶液，防止酶失活。

② 加碘乙酸抑制酶解作用。