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师姐亲传的石蜡切片锦囊，绝了！

点击次数：  更新时间：2017/10/28 9:42:24  

古有：“江左梅郎，麒麟之才，得之可得天下。今遇，师姐亲传石蜡切片锦囊，切记收藏下来，进退两难之时，难题便迎刃而解。

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简介

石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。

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实验步骤之固定

固定：将新鲜组织切成小块，固定于4%多聚甲醛过夜，当然也有其它类型的固定液。

原理：固定时间则根据材料块的大小及松密程度而定。固定可以凝固组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持其活体时的结构。同时能使组织硬化，有利于切片的进行。

注意事项：①凝固组织中的物质成分，尽可能保持其活体时的结构；②同时能使组织硬化，有利于切片的进行；③若为实质组织及含脂肪较多的组织，一定要切开固定并且延长固定时间；④对于未能良好固定的组织，还是有可能得到质量较差的形态学结果。

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实验步骤之脱水

脱水：从低浓度到高浓度递增的顺序进行经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1小时。（目的：减少组织材料的急剧收缩）

注意事项：固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响后期的染色效果。

原理：透明剂多数是苯类，苯类和石蜡均不能与水相融合，水分不能脱尽，苯类无法浸入。酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混。

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实验步骤之透明

透明：材料块在透明剂浸渍过程，常用的透明剂有二甲苯，二甲苯是石蜡的溶剂。

原理：纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的溶剂，替换出组织内的酒精。

注意事项：此步最好在通风厨进行；纯酒精不能与石蜡相溶；

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实验步骤之浸蜡

浸蜡：

①先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1小时。

②移入2个熔化的石蜡液中浸渍1小时左右。

原理：使石蜡浸入组织而起支持作用。

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实验步骤之包埋

包埋：以少许热蜡液将其底部迅速贴附于包埋盒内上，然后置于速冻台，让石蜡固定。

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实验步骤之切片

切片：用毛笔轻托轻放在37度水浴中展片，通常切片厚度为3-5um。

注意事项：

①切片之前，一定要选择锋利刀片（切片之前可以将刀片在磨刀石上磨一磨），这样才能切出质量上乘的石蜡切片；

②可将蜡块至于冷水中改变蜡块硬度。

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实验步骤之贴片与烤片

贴片与烤片：一般使用恒温水浴锅，温度控制在37-40℃左右，有利于石蜡切片的展开，贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时，蛋白质凝固后即可染色。

注意事项：若对于一些不稳定的分子，则需要适当缩短烤片时间，甚至可以用冰冻切片去做）。

（脱蜡中洪博元实拍图）

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实验步骤之脱蜡

切片脱蜡及水化：干燥后的切片置于二甲苯中进行脱蜡，然后依次使用从高浓度到低浓度递减的顺序进行经纯酒精、95%、85%、70%进行水化。

注意事项：脱蜡需小心，脱蜡太过可导致组织脱片，脱蜡不足则可导致染色不佳。若是新的二甲苯，建议只需脱蜡2-3min，若为旧的二甲苯，则需脱蜡7-10min。

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实验步骤之染色

染色：将纯二甲苯脱蜡完全的材料，1/2 二甲苯十1/2纯酒精→100%酒精→95％酒精→85％酒精→70％酒精→50％酒精→1%番红染色(4h以上) →50％酒精→70％酒精→85％酒精→95％酒精→0.5%固绿(1min)→95％酒精→100%酒精→100％酒精(未注明时间各级均为3min) 

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实验步骤之胶封

胶封：滴加加拿大树胶封藏。