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如何提取动物组织DNA

点击次数：  更新时间：2017/10/24 9:19:44  

1. 浓盐法

   
   

利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离。

1）用1M 氯化钠提取，得到的DNP粘液；

2) 与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡，使乳化；

3) 离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中；

4) 用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来。

2.阴离子去污剂法

用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性, 可以直接从生物材料中提取DNA。

由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合, 而阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA。

3.苯酚抽提法

材料：冷冻或新鲜猪肝组织

设备：EP管、微量取液器(20μl， 200μl，1000μl)， 台式高速离心机， 涡旋振荡器；

操作步骤

1）样品预处理

取新鲜动物组织25-50 mg（组织量不宜过多，否则容易导致裂解不完全而堵塞离心柱），组织剪碎或者切成小块放入研钵研磨捣碎。

2）加入600 μl 的Lysis Buffer，颠倒充分混匀。如需消化RNA，可加入20 μl RNase A，颠倒混匀，室温放置5 min。

3）加入10 μl Proteinase K，混匀。56℃水浴45 min-1 h，其间颠倒混匀数次直到看到组织完全裂解，裂解完全的标准为液体变得清亮及粘稠。（此步骤可以过夜处理）

4）12,000 rpm 离心10 min，将上清转入新的离心管中，加入800 μl 无水乙醇，混匀。

5）将液体转入离心柱（一次加不完，可分次转入），12,000 rpm 离心1min，弃废液。

6） 加入700 μl Wash buffer A（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心30 s -1 min，弃废液。

7）加入700 μl Wash buffer B（使用前请先检查是否已加入无水乙醇）， 12,000 rpm 离心30 s -1 min，弃废液。

8）加入500 μl Wash buffer B，12,000 rpm 离心30 s-1 min，弃废液。

9）再次12,000 rpm 离心2 min，将离心柱置于新的离心管中，并打开离心柱盖，于室温或37℃恒温箱放置5~10 min，直至无明显乙醇味。

10）在硅基质膜中央加入50-200 μl TE buffer(事先预热55-65℃)，置于室温2-5 min，12,000rpm 离心30 s。

11）离心得到的溶液再次加入离心柱中，室温放置2min， 12,000 rpm 离心2 min。所得的溶液为纯化后的基因组DNA。