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RNA提取又不合格？一文教你搞定这个小妖精！

点击次数：  更新时间：2017/10/17 9:06:13  

RNA提取的基本原则

（1）保证RNA的完整性。

（2）获得高纯度的RNA。

（3）操作简便，稳定性强。

为什么RNA易降解

RNA容易降解有内因也有外因，从自身结构来说RNA是单链分子，本身很不稳定，另外RNA分子2’位置上有游离的羟基，易形成2’，3’-环形磷酸盐中间产物，易分解。从外因来看RNase无处不在，并且RNase本身热稳定性高、不容易失活。

提取方法的选择

RNA提取最常用的是TRIzol法和试剂盒法，二者各有优劣，中洪君建议根据研究目的进行选择。

避免RNA讲解的注意事项

使用正确的细胞或组织的储存条件

保存条件：液氮、-80℃冰箱、干冰。

保存效果：液氮> -80℃冰箱>干冰。

样品分装：按实验需求最小量保存多份，避免反复冻融。

消除环境RNase的污染

为了得到完整的、高品质 RNA，在整个 RNA 制备过程中，当 RNA 离开强蛋白变性剂（如离液裂解液或酚）的保护时，避免引入新的 RNase 污染就非常关键。由于 RNase 几乎是无所不在，所以必须确保与纯化的 RNA 接触的每一样东西都是无 RNase 污染的。所有的表面，包括移液器、工作台、玻璃器皿和制胶设备，都必须用表面去污净化溶液如 RNase 喷雾清除剂来处理过，去除各种溶液或者反应缓冲液中可能存在的 RNase 污染，可以用 RNAsafe。必须保证一直使用无 RNase 的枪头、试管和溶液，手套也应经常更换。 

迅速灭活内源的RNA酶

1）用含离液（如胍盐）的细胞裂解液收获样品，并立即匀浆。 

2）用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是：组织块必须保证足够小，在浸入液氮的瞬间就能冻结，以确保瞬间令 RNA 酶失活。 

3）立即将样品置于 RNAfixer 无液氮 RNA 样品储存液中。它是一种水相、无毒的收集试剂，能立即稳定并保护完整、未冻结的组织和细胞样品中的 RNA。关键要点是组织样品切片一定要够薄（<0.5 cm），这样 RNAfixer 才能在 RNase 破坏 RNA 之前迅速渗入组织块中。 

选择合适的破壁方法

匀浆的方法应根据细胞或组织的类型来选择。

选择合适的RNA提取试剂（盒）

对于动物细胞，组织，植物叶片等常用材料都基本适用。植物 RNA 的提取比较难抉择，像根和果实等，由于多糖，多酚物质的存在，很难纯化；还有就是血清等液体样本的提取，水分多或者 RNA 含量少等，较难提取。可以采用针对性的试剂（盒）