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细胞染色法来这一套，实验不再愁

点击次数：  更新时间：2017/10/16 9:21:43  

HE染色

1. 脱蜡复水： 石蜡切片经二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各5min，然后放入100%、95%、90%、80%、70%各级酒精溶液中各3-5min，再放入蒸馏水中3min。

2．染色：切片放入苏木精中染色约10-30min。

3．水洗：用自来水流水冲洗约15min。使切片颜色变蓝（或放入碱性水中也可），但要注意流水不能过大，以防切片脱落。

4．分化：将切片放入1%盐酸乙醇液中褪色，约2秒至数十秒钟。见切片变红，颜色较浅即可。

5．漂洗：切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。

6．脱水Ⅰ：切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各3-5min。

7、复染：用0.5%伊红乙醇液对比染色1-3min。

8．脱水Ⅱ：将切片放入95%乙醇中洗去多余的红色，然后放入无水乙醇中3-5min。最后用吸水纸吸干多余的乙醇。

9．透明：切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3-5min。

10．封藏：中性树胶封存

瑞氏染色

1.将对数生长期NB4RA细胞以2×105/ml的浓度接种于6孔板中, 每孔接种细胞悬液体积为4ml。

2.按以上各分组处理细胞。

3.在倒置显微镜下直接观察培养板中的细胞并拍照。

4.每培养24小时收集细胞，共观察6天，

5.PBS洗涤一次，用约30μl PBS重悬细胞，

6.常规涂片后自然干燥,，

7.加入瑞氏染液适量，1-2分钟后加入缓冲液中和，

8.室温放置约5-10分钟，细流水冲去染液，室温干燥。

9.倒置显微镜下观察细胞形态并拍照。

Masson染色

1.组织固定于10%的福尔马林中，常规脱水包埋。

2.切片厚4μm，常规脱蜡至水。

3.切片入Bouin 液，于室温作用一晚或置入37℃的温箱内2h 进行媒染，然后流水冲洗至切片上的黄色消失。

4.天青石蓝染色液滴染2~3min。

5.稍水洗。

6.Mayer 苏木素染色液滴染2~3min。

7.稍水洗。

8.酸性乙醇分化液分化数秒。

9.流水冲洗10min。

10.丽春红品红染色液滴染10min。

11.蒸馏水稍冲洗。

12.磷钼酸溶液处理约10min。

13.倾去上液，切片不用水洗，直接滴入苯胺蓝染色液染5min。

14.弱酸溶液处理2min。

15.95%的乙醇快速脱水。

16.无水乙醇脱水3 次，每次5~10s。

17.二甲苯透明3 次，每次1~2min。

18.中性树胶封固。

甲苯胺蓝染色法

1.常规脱钙，包埋、固定

2.石蜡切片入二甲苯二次，每次15min

3.系列乙醇各1min，自来水洗2min

4.入软骨染色液，浸染15-20min，根据不同组织，染色时间不完全相同

5.自来水洗2min，滤纸吸干水分

6.丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见

7.逐级乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

Giemsa染色

1.根据需要量，取8ml双蒸水，加入姬姆萨原液1ml，再加入姬姆萨稀释液1ml，再加入姬姆萨稀释液1ml，混匀即为工作液，此工作液常温可保存两周。

2、按常规方法将石蜡切片脱蜡水化，PBS清洗。

3、将切片放到染色架上，滴加2-3滴染色工作液，使覆盖全部组织，室温染色15-30分钟。

4、用自来水缓慢从玻片一端冲洗，晾干后镜检。