实验方法

DNA实验技术 您的位置:首页 > 实验方法 DNA实验技术

动物组织DNA的提取方法大汇总

点击次数:  更新时间:2017/10/14 14:50:04  

动物肝脏DNA提取可以:(1)用于法医学鉴定;(2)诊断和系统发育研究;(3)用于进一步的聚合酶链式反应(PCR)以获得DNA,本次中洪君为你带来的是三种方法中助力你一臂之力!

浓盐法


利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同,将二者分离。


1)用1M 氯化钠提取,得到的DNP粘液;


2) 与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化;


3) 离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中;


4) 用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来。


阴离子去污剂法


用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性, 可以直接从生物材料中提取DNA。


由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合, 而阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA。

(实拍图)

苯酚抽提法


材料:冷冻或新鲜猪肝组织


设备:EP管、微量取液器(20μl, 200μl,1000μl), 台式高速离心机, 涡旋振荡器;


操作步骤


1)样品预处理


取新鲜动物组织25-50 mg(组织量不宜过多,否则容易导致裂解不完全而堵塞离心柱),组织剪碎或者切成小块放入研钵研磨捣碎。


2)加入600 μl 的Lysis Buffer,颠倒充分混匀。如需消化RNA,可加入20 μl RNase A,颠倒混匀,室温放置5 min。


3)加入10 μl Proteinase K,混匀。56℃水浴45 min-1 h,其间颠倒混匀数次直到看到组织完全裂解,裂解完全的标准为液体变得清亮及粘稠。(此步骤可以过夜处理)


4)12,000 rpm 离心10 min,将上清转入新的离心管中,加入800 μl 无水乙醇,混匀。


5)将液体转入离心柱(一次加不完,可分次转入),12,000 rpm 离心1min,弃废液。


6) 加入700 μl Wash buffer A(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm 离心30 s -1 min,弃废液。


7)加入700 μl Wash buffer B(使用前请先检查是否已加入无水乙醇), 12,000 rpm 离心30 s -1 min,弃废液。


8)加入500 μl Wash buffer B,12,000 rpm 离心30 s-1 min,弃废液。


9)再次12,000 rpm 离心2 min,将离心柱置于新的离心管中,并打开离心柱盖,于室温或37℃恒温箱放置5~10 min,直至无明显乙醇味。


10)在硅基质膜中央加入50-200 μl TE buffer(事先预热55-65℃),置于室温2-5 min,12,000rpm 离心30 s。


11)离心得到的溶液再次加入离心柱中,室温放置2min, 12,000 rpm 离心2 min。所得的溶液为纯化后的基因组DNA。