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单层细胞的荧光标记实验流程

点击次数：  更新时间：2016/10/8 10:33:55  

实验材料:单层细胞

试剂、试剂盒:PBS多聚甲醛甲醇抗体

仪器、耗材:离心机水浴锅培养箱

实验步骤

1.  置生长成片的单层细胞于冰上冷却，吸去培养液并以4℃PBS洗涤。吸去PBS。

 

2.  如欲研究细胞表面抗原，则以2%PFA于冰上面定30 min。如为细胞质抗原，则可用含0.1% Triton X-100的2%PFA于冰上固定30 min，或以100%甲醇在普通冰箱的结冻室（-10~-20℃）固定15 min。

 

3.  吸去固定液，用4℃PBS洗2次（毎次5 min）。稀释的笫一抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min。

 

4.  加第一抗体于培养皿中，使其恰好覆盖细胞，4℃温育1 h，然后用4℃PBS洗4次（每次5 min）。

 

5.  稀释的笫二抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min。

 

6.  加第二抗体于细胞上，4℃温育4 h。然后用4℃PBS洗4次。

 

7.  若不想立即观察细胞，则将细胞于PBS中存放。盖好培养皿，以铝箔包裹，冷藏，在24 h 内观察此实验结果是很重要的，因荧光会迅速减弱或与细胞解离。