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操作篇：western blot 之增强敏感性

点击次数：  更新时间：2016/10/18 10:50:59  

若目的条带未出现，或很淡，可试用以下方法增强发光强度：

1．用清水漂洗膜数分钟，重加发光液进行曝光，可延长曝光时间；

2．将膜在 PBST 或 TTBS 中洗涤 30 min 或更长，期间至少换 2 次液；

3．封闭 40~60 min；

4．一抗杂交，室温 1 h。37℃ 1 h 会更强，但可能增加非特异条带；

5．PBST 或 TTBS 洗膜 20 min，期间换 2 次液；

6．二抗杂交，37℃ 1 h；

7．PBST 或 TTBS 洗膜 20 min，期间换 2 次液；

8．发光鉴定；

9．若条带仍未出现或很淡，可以再用 PBST 或 TTBS 洗涤膜 20 min，期间换 2 次液；

10．三抗杂交，室温 1 h。37℃ 1 h 会更强，但可能增加非特异条带。三抗即抗二抗的二抗，比如二抗用羊抗兔，此时三抗可以选择兔抗羊或鼠抗羊等；

11．PBST 或 TTBS 洗涤膜 20 min，期间换 2 次液；

12．发光鉴定。

注：一抗溶液中加入0.2% 叠氮钠后，可4℃存放至少 2 周，存放一个月也用过，没问题，再长时间还没试过。